题目：以小檗碱为荧光探针识别G-四聚体DNA结构及钾离子的荧光法测定

二十一世纪是生命科学飞速发展的时期，荧光分析方法因其高灵敏度、高选择性、简单、快速等优点，已在生命分析中得到广泛的应用。本论文建立了两种基于DNA序列无需标记的荧光分析新方法，具体工作如下：
一、以小檗碱为荧光探针识别G-四聚体DNA结构及钾离子的荧光法测定
小檗碱（Berberine，BR）是从植物中提取的一种异喹啉类生物碱，是一种带部分正电荷的、具有可拓展的离域π-π体系的平面结构药物，在水溶液中自身几乎不发荧光。研究表明小檗碱具有很好的抗肿瘤作用。G-四聚体是由富G的寡核苷酸序列形成的四集体之间通过非共价的π-π堆积作用而形成的。我们研究发现，小檗碱在单链DNA、双链DNA及G-四聚体DNA存在下具有不同的荧光特性。相对于单链DNA、双链DNA，G-四聚体DNA可以与小檗碱之间产生强相互作用，形成小檗碱–G-四聚体的复合体，此复合体具有强的荧光。可见，小檗碱可以用作荧光探针来识别G-四聚体DNA结构。另一方面，基于小檗碱–G-四聚体体系在不同离子（Na+、K+）条件下荧光强度的不同这一现象，我们建立了一种简单的、灵敏的钾离子荧光测定新方法。对此体系的试验条件进行了详细的优化。在选定的最优试验条件下，钾离子的浓度在5.0 × 10–6–1.0 × 10–3 M范围内与小檗碱–G-四聚体体系的荧光差值（F–F0）呈良好的线性关系，相关系数是0.9967。紫外可见吸收光谱、荧光光谱、圆二色谱等手段探讨了此体系的荧光发光机理。和其他分析方法相比，该方法具有操作简单、灵敏度高、选择性高、线性范围宽等优点。此外，利用小檗碱为探针，还具有易从商业购得，无毒等优点。并能成功的应用于尿样中钾离子含量的测定。
二、以灿烂绿为荧光探针免标记的DNA序列杂交检测
灿烂绿（Brilliant Green，BG）是碱性三苯甲烷类染料中的一种，自身几乎不发荧光，当将双链DNA加入到灿烂绿溶液中时，我们观察到灿烂绿的荧光显著增强，而当把单链DNA加入到灿烂绿溶液中时并没有此现象。受此试验现象的启示，我们建立了一种免标记的、均相的检测DNA序列杂交的荧光分析新方法。对此体系的试验条件进行了详细的优化。在选定的最优试验条件下，目标DNA的浓度在3.0 × 10–8–4.0 × 10–6 M范围内与体系的荧光比率（F/F0）呈良好的线性关系，相关系数是0.9994。研究表明这种荧光探针能明显的把完全互配的DNA序列与一个碱基错配的、三个碱基错配的和碱基完全错配的DNA序列区分开。所以此荧光探针具有高的选择性。通过紫外可见吸收光谱、荧光光谱、荧光偏振、圆二色谱等手段分别研究了灿烂绿与DNA分子之间相互作用的机理。与经典的嵌插剂溴化乙锭（EB）相比，灿烂绿对DNA序列杂交检测的灵敏度优于溴化乙锭。