题目：质膜微囊的提取鉴定及原子力显微镜研究

       摘 要

质膜微囊是细胞膜表面呈倒Ω状的动态微区结构，直径约为10-200 nm，富含胆固醇﹑鞘脂﹑神经节苷脂﹑小窝蛋白﹑GPI锚定蛋白。与细胞膜上其他区域相比较，它的质地紧密，流动性小。质膜微囊主要分布于肌肉细胞（心肌、骨骼肌、平滑肌）、脂肪细胞、内皮细胞中，在细胞信号转导、细胞蛋白运转、胆固醇的胞内运输等方面发挥重要作用，与感染性疾病、肿瘤、肌营养不良、朊病毒病等一些重大疾病的发生有关。
本论文主要的研究工作有：
本研究工作采用新鲜鸡胗为实验材料，经过差速离心制得质膜，再用两层蔗糖密度梯度及KI溶液进一步纯化质膜。然后采用去污剂Triton X-100溶解质膜，超速离心后，在离心管中观察到了白色絮状不溶性漂浮物，利用辣根过氧化物酶标记的霍乱毒素B亚基(CTB-HRP)对其进行亲和标记GM1（一种质膜微囊的标记分子）来鉴定质膜微囊。质膜微囊的稀释液铺展在新鲜剥离的云母片上，应用原子力显微镜(AFM)对其进行了观测，得到了清晰、重复性好的图像。实验发现， 质膜微囊呈直径约为100 nm，高约为25 nm的扁球状结构.
实验还尝试了用非去污剂方法提取纯化质膜微囊结构，在进行蔗糖密度梯度超速离心之前，不经过去污剂Triton X-100处理质膜过程。实验发现，在5％/30％的蔗糖界面富集了白色絮状不溶性沉淀漂浮物，经CTB-HRP检测，证实为质膜微囊。同时应用原子力显微镜观测，大小形貌同采用去污剂方法提取纯化的质膜微囊相同。
实验用原子力显微镜对质膜和两种方法制备的质膜微囊进行了力－距离图谱表征，实验发现在探针接近和撤离样品表面过程中具有不同程度的压痕深度、跳离线程力曲线图谱，表征了不同的样品表面存在着复杂的作用力。结果表明，非去污剂方法制备的质膜微囊具有最大的黏附力，其次为采用去污剂方法制备的质膜微囊，质膜具有最小的粘附力。分析原因，是由于质膜微囊富含鞘脂的缘故，鞘脂在脂质组分中微黏性较大。去污剂的使用，降低了质膜微囊表面的粘附力。这需要进一步研究确认质膜微囊的微黏性较大的物理现象是否与其生理生化功能有联系。
用SDS－PAGE检测了质膜和质膜微囊中的蛋白质含量。实验发现，质膜微囊中含有大部分膜蛋白。这说明，质膜上大部分蛋白质富集在质膜微囊结构中，质膜微囊在募集信号分子中发挥重要作用，它是执行细胞膜功能的重要的微区结构。质膜微囊富含胆固醇，实验对蔗糖密度超离心后得到的10个组分中的胆固醇含量进行了检测，实验发现胆固醇最高含量出现在组分3中，对应着5%/30%的蔗糖界面。
以上研究为进一步研究质膜微囊结构和功能提供了重要的实验依据和新的思路，具有重要的意义。