题目：超声对三叶木通叶片愈伤组织生长及代谢影响的研究

摘  要
三叶木通(Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz)系木通科木通属(Akebia)藤本植物，是药典中木通之正品，主要药用其藤茎部位，果实、种子、根以及叶片也都有药用功效。针对目前国内三叶木通野生资源不足和提取有效成分对三叶木通野生资源破坏严重的情况，以及在理论上进一步深入了解超声的生物学效应，本文以三叶木通叶片为研究对象，研究经过不同时间超声处理对三叶木通叶片愈伤组织的诱导及继代生长的影响，对三叶木通叶片愈伤组织保护酶活性及次生代谢产物产生的影响，并分别探讨了超声处理对三叶木通愈伤组织表面结构及显微结构的影响。以期探索提高药用植物次生代谢产物的新方法，同时为超声波的生物学效应研究积累资料。本实验研究结果如下：
1.       超声处理对三叶木通叶片愈伤组织诱导及生长的影响。超声处理三叶木通幼嫩叶片1min后，接种于培养基MS+2,4-D2mg/L+KT0.5mg/L中能有效诱导三叶木通叶片愈伤组织的发生，接种13d后，经超声处理的叶片在切口处开始出现白色或淡黄色的愈伤组织，愈伤组织诱导率最高，为74.07%，与对照组及其他处理组差异显著（p<0.05）。适宜时间的超声刺激能够有效促进三叶木通叶片愈伤组织的继代生长：超声处理三叶木通叶片愈伤组织6min，接种于培养基MS+2,4-D2mg/L+KT0.5mg/L中，三叶木通愈伤组织对数生长期比未经超声处理的愈伤组织提前5-10d，且其鲜重生长量及干重生长量分别为2.42g，0.191g，均与对照组差异显著（p<0.05），而超声处理8min及10min，不利于愈伤组织的继代生长。
2.       超声处理对三叶木通叶片愈伤组织分化及防止褐化的影响。不同时间超声处理对三叶木通叶片愈伤组织分化率及褐化率影响不同：其中超声处理4min，接种于分化培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.3mg/L+PVPP0.6mg/L培养基中生长35d，愈伤组织分化率最高，达到79.01%，与对照组差异显著（p<0.05），且愈伤组织褐化率最低，为33.33%，与对照组差异显著（p<0.05）。研究表明，超声处理4min及6min促进了愈伤组织的生长，较早启动了三叶木通叶片愈伤组织芽的分化并能有效降低三叶木通愈伤组织的褐化率。
3. 超声处理对三叶木通叶片愈伤组织保护酶活性的影响。超声处理4min与超声处理6min的三叶木通叶片愈伤组织，其SOD活性、CAT活性及POD活性均在处理后8d时达到最高值；且超声处理4min与6min的三叶木通叶片愈伤组织SOD活性及CAT活性均在培养过程中显著增高，与对照组差异显著（p<0.05），而超声处理6min的愈伤组织POD活性在培养过程中有所增高，与对照组差异不显著（p>0.05）。表明超声刺激激活了SOD、CAT活性。
4.       超声处理对三叶木通叶片愈伤组织表面结构及显微结构的影响。环境扫描电镜观察结果表明：未经超声处理的三叶木通愈伤组织表面较光滑，愈伤组织表现为一种无规则的状态；而经过超声处理的愈伤组织，部分细胞形成细胞团结构，细胞或细胞团之间结合疏松，愈伤组织的细胞大小较均一，呈颗粒状。说明超声处理4min与6min均能有效促进愈伤组织的分化生长。石蜡切片观察结果表明，一定时间的超声处理后，三叶木通愈伤组织中出现了细胞核变明显，薄壁细胞数量增多的现象。说明超声波处理4min与6min均能有效促进三叶木通叶片愈伤组织的增殖或分裂。
5.       超声处理对三叶木通叶片愈伤组织分化生长及齐墩果酸含量的影响：实验研究显示，将三叶木通叶片愈伤组织接种于分化培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+KT0.3mg/L
+PVPP0.6mg/L中，三叶木通叶片愈伤组织的鲜重生长曲线与干重生长曲线均呈S型，结果显示，三叶木通愈伤组织的最佳分化培养时间为35d，培养35d有利于三叶木通愈伤组织的分化生长及愈伤组织中齐墩果酸的积累。超声处理对三叶木通叶片愈伤组织的分化生长及齐墩果酸含量影响不同：其中未经超声处理，接种于分化培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+ KT0.3mg/L+PVPP0.6mg/L中生长35d，愈伤组织生长缓慢，愈伤组织中齐墩果酸含量为0.012285%；而超声处理4min愈伤组织生长较快，与对照组差异显著（p<0.05），齐墩果酸含量为0.014565%，与对照组差异不显著。表明给予三叶木通叶片愈伤组织超声处理4min有利于三叶木通叶片愈伤组织的分化生长；超声处理4min及未经超声处理均有利于愈伤组织中齐墩果酸的积累。
关键词：三叶木通，超声处理，愈伤组织，保护酶，显微结构