题目：BPA对雄性中国林蛙肝细胞中雌激素受体和卵黄蛋白原的影响

近年来，随着工农业的快速发展，大量危害环境和人类健康的化合物被不断释放到环境中。越来越多的证据证实，环境中许多化学污染物可干扰野生动物和人类的正常生理活动。研究表明，双酚A（bisphenol-A,BPA）作为环境雌激素可影响两栖动物的生长发育及繁殖，同时，酚类诱导其他动物细胞中雌激素受体（ER）或卵黄蛋白原（VTG）生成的研究也不乏报道，但有关BPA对两栖动物肝细胞中ER和VTG生成及其关系的影响很少有报道。本实验以雄性中国林蛙（Rana chensinensis）为实验动物，探讨BPA对中国林蛙肝细胞中ER和VTG的影响，旨在揭示酚类环境化学污染物的作用机制，从而深入理解BPA的雌激素效应，探讨雌激素受体和卵黄蛋白原的关系，为澄清BPA的分子机制提供理论依据。
本实验将中国林蛙暴露于10－7、10－6、10－5mol/L BPA水体中持续10d、20d、30d；以10－9和10－8mol/L 17β-雌二醇（17β-estradiol，E2）作为阳性对照，取其肝脏组织，用免疫组织化学方法检测ER和VTG的表达，用原位杂交方法检测ER mRNA的表达。实验结果及结论如下：
1. 免疫组织化学检测结果可见，在各BPA处理组和E2处理组中均有ER表达，ER阳性反应在胞核呈黄或棕黄色，在胞质中呈片状。对ER表达相对值检测结果表明，与对照组相比，各BPA处理组的中国林蛙肝细胞中ER表达量显著上调，且BPA处理组的ER表达量显著低于E2对照组。BPA处理组中，ER表达量随BPA浓度的升高而上调，随着BPA处理时间的延长而上调。与E2处理组中，ER表达的变化趋势相似。
原位杂交法检测ER mRNA的表达结果表明，在BPA处理组和E2处理组肝细胞中均存在ER阳性核颗粒。阳性反应在胞核呈蓝色，在胞核膜上呈环形或半环形，胞质中呈片状。各BPA和E2处理组中ER mRNA的表达量均高于对照组。各处理组中，ER mRNA的表达随着处理时间的延长而增加，随着处理浓度的增大而增加，且差异显著，但BPA10-5和 BPA10-6 mol/L处理组ERmRNA的表达差异不显著。
在相同的处理时间，BPA诱导ER mRNA表达与ER蛋白合成具有相关性，说明BPA在中国林蛙肝细胞内存在剂量效应和积累效应。同时，BPA的效应同E2的效应相似，说明BPA和E2引起ER表达的途径相似。但ER蛋白合成滞后于ER mRNA表达量增加的时间，可能是由于BPA和E2在短时间内可引起ER mRNA表达的显著变化，而蛋白的合成则是一长时过程。
2. 用免疫组织化学技术检测经过BPA处理后中国林蛙的肝细胞中VTG的表达，VTG阳性反应在胞质中呈黄或棕黄色。对其表达相对值检测结果表明，各BPA处理组与对照组相比，肝细胞中VTG表达量差异显著，BPA处理组的VTG表达量上调。BPA处理组的VTG表达量低于E2对照组。在BPA处理组中，VTG表达量随BPA处理时间的延长而上调，随处理浓度的升高而上调。表明VTG的表达与BPA间有剂量-时间效应关系，与E2处理组的效应相似。BPA10-5mol/L处理组有导致中国林蛙肝细胞中VTG合成水平降低的趋势，可能是BPA10-5 mol/L处理组开始引起中国林蛙肝细胞坏死。
3. BPA处理后从中国林蛙肝细胞中ER与VTG之间的关系可见，BPA能诱导ER和VTG的表达增加，二者的变化趋势基本一致，说明ER的合成过程伴随着VTG的生成，VTG的表达依赖于ER的水平，BPA通过ER途径诱导VTG蛋白的合成。
4. 本实验中E2作为阳性对照，在相同处理时间，BPA与E2处理导致ER和VTG的变化趋势基本一致，说明BPA产生的效应与E2相似，但是，BPA的最低处理浓度比E2的最高处理浓度高一个数量级，表明E2的雌激素效应高于BPA的。
上述结果表明，BPA可影响中国林蛙肝细胞中ER和VTG的表达，BPA可通过诱导ER表达来诱导VTG的合成。