问题:
关键词:壳聚糖多肽共聚物,自发荧光团,荧光探针,细胞毒性研究
● 参考解析
天然高分子材料甲壳素、壳聚糖分子链上富有大量的反应性官能团,易于通过自由基引发接枝共聚,也可与其它高分子链偶合制得接枝共聚物。通过接枝共聚改性,可以赋予甲壳素和壳聚糖以某些新的性能,扩大了其应用范围。本文通过人工手段合成类似结构糖蛋白,将之作为荧光探针,研究其对活体细胞的标记作用。在氢氧化钠水溶液-乙酸乙酯均相体系中,利用壳聚糖分子上的自由氨基引发巯基被保护的L-半胱氨酸环内酸酐(NCA)的开环聚合,将聚L-半胱氨酸引入低分子量水溶性的壳聚糖的侧链,合成一系列拥有不同长度的聚L-半胱氨酸侧链的壳聚糖-多肽接枝共聚物。通过红外光谱、固体核磁共振、X射线衍射、元素分析、荧光光谱等手段对所合成的共聚物的结构和性能进行表征。结果发现:合成的接枝共聚物呈片状粉末;并且其溶解性能、荧光性能及其聚-L-半胱氨酸侧链的二级结构均与其聚-L-半胱氨酸侧链的长度有关:随着聚-L-半胱氨酸侧链长度的增加,其水中的溶解度相应降低;聚-L-半胱氨酸侧链的二级结构由β折叠向α螺旋结构过渡,同时,荧光光谱最大吸收峰向L-半胱氨酸的光谱位置发生蓝移,且荧光光谱偏移量与接枝度呈良好线性关系(R=0.99),为依据荧光位移计算共聚物接枝度新方法的建立提供理论支持。根据L-半胱氨酸拥有自发荧光团的特性,将壳聚糖-聚-L-半胱氨酸接枝共聚物作为自发荧光探针,研究其对体外活细胞的标记作用及其细胞的毒性。利用荧光显微镜研究共聚物具有的稳定的自发荧光,中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)有明显蓝色荧光标记效果。激光扫描共聚焦显微镜观察证实了该共聚物可对活细胞的细胞质进行特异性荧光标记。结合吖啶橙(AO)对细胞RNA、DNA的特异性荧光标记,可以清晰的观察到细胞的细胞核区呈黄绿色,胞浆区的RNA呈现红色,而细胞质区域呈现强烈的蓝色荧光。在体外细胞毒性实验中,根据联酶检测仪来精确测定与共聚物共培养的细胞所得到的增殖率(MTT比色法),对聚合物在细胞内的毒性级别进行评价。结果表明,共聚物对CHL细胞的毒性级别不超过2,可判定为共聚物对细胞轻微毒性,但对细胞新陈代谢和增殖影响不明显,因此该共聚物可作为常规细胞的荧光探针对细胞等开展广泛的研究,并在临床上具有潜在的应用价值。
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