题目：基于分子识别的溶菌酶和博来霉素光学检测新方法的研究

核酸适体（Aptamer）也称为核酸适配体，是一段由20～100个碱基组成的单核苷酸片段，可以是DNA也可以是RNA。适体与其相应的配体具有高的亲和力，它可以特异性的识别一系列目标物（如小分子、金属离子、蛋白质、核酸、细胞、组织和生物体等）。与抗体和酶相比，适体表现出很多突出的优点，如进行体外筛选、易于修饰和合成、化学稳定性好、可以长时间保存和重复利用。因此，基于适体作为分子识别物质的生物传感器具有灵敏度高、稳定、易于制备、响应速度快、目标范围广等优点，已经被广泛应用于医学诊断和环境检测当中。本论文由以下四部分组成。
第一章为综述，主要介绍了适体的特点、筛选方法；荧光法和比色法的基本原理和特点以及在分析化学中的研究进展；单核甘酸多态性的概念、分类、检测以及应用。最后，介绍了本论文的研究目的和研究内容。
第二章提出以溶菌酶适体（LBA）为分子识别物质，溴化乙锭（EB）为荧光信号物质，建立了一种非标记型检测溶菌酶的荧光新方法。单独的溴化乙锭荧光很弱，它嵌入DNA双链中时，体系荧光强度明显增强；当向上述体系中加入溶菌酶之后，由于适体的高亲和力，使得溶菌酶更趋向于与目标物结合，DNA双链结构被破坏，EB重新进入溶液中，体系荧光强度减弱。根据体系荧光强度的变化，可以在溶液中对溶菌酶进行检测。在优化的条件下，体系荧光强度变化率与溶菌酶浓度在1.0×10-7 mol/L～9.0×10-7 mol/L范围内呈良好的线性关系，相关系数为0.9938，检出限3×10-8 mol/L（S/N=3）。此方法对适体和目标物均无需标记，具有简单，选择性高的优点。
第三章提出以溶菌酶适体为分子识别物质，纳米金粒子为信号物质，建立了一种非标型检测溶菌酶的比色新方法。当不存在目标物溶菌酶时，单链适体DNA包裹在纳米金粒子表面，加入一定浓度的NaCl之后，纳米金粒子不聚沉，颜色保持原来的酒红色；向上述体系中加入溶菌酶后，溶菌酶与适体发生特异性结合，导致溶菌酶适体远离纳米金粒子表面，加入一定浓度的NaCl后，纳米金发生了聚沉，溶液颜色由酒红色变为紫色，最大吸收波长发生了红移，由原来的523 nm 红移至600 nm。随着溶菌酶浓度的增大，溶液颜色逐渐加深。同时，600 nm和523 nm处的吸光度比值（A600/A523）也逐渐增加。在优化的实验条件下，吸光度比值A600/A523与溶菌酶浓度在1.0×10-9～7.0×10-8 mol/L范围内呈线性关系，相关系数为0.9854，检出限为3×10-10 mol/L（S/N=3）。实验结果表明，该方法具有简单、快速的特点。
第四章提出了以含有CC错配的发卡型DNA为检测探针，荧光杂环小分子ATMND为信号物质，建立了一种非标记型检测博来霉素的荧光新方法。在含有C/C错配的发卡型DNA溶液中，加入能够与C碱基形成氢键的ATMND时，ATMND就会进入双链中碱基错配的位置，通过氢键与未配对的C碱基结合，这一过程也伴随着ATMND荧光的淬灭，因此，体系的荧光强度很弱；当向上述体系中加入BLM和Fe(II)时，它与氧结合之后产生的自由基就会将发卡型的DNA探针切断（5’-GC/T-3’），从而使得ATMND从双链中释放出来，体系的荧光强度明显增强。我们根据加入复合物Fe(II)·BLM前后ATMND荧光强度的变化，可以对博来霉素进行检测。在优化的实验条件下，体系的荧光强度变化值与博来霉素的浓度在2.0×10-8~9.0×10-7 mol/L范围内呈良好的线性关系，相关系数为0.9931，检出限为7×10-9 mol/L。同时我们通过考察不同的二价金属离子对博来霉素诱导DNA的断裂发现，只有在二价亚铁离子的作用下，博来霉素诱导DNA的断裂效果最好。本方法具有简单、快速、灵敏度高的特点。