题目：基于凝血酶核酸适配体非标记型荧光传感器的研究

在20世纪末，研究者在生物分析领域利用指数富集配体的系统进化技术筛选得到了一类独特的寡核苷酸探针——核酸适配体。核酸适配体能特异性地结合蛋白质、多肽、有机物小分子、金属离子等各种目标物，并且核酸适配体具有易合成、易存储、易修饰等优点，因此利用核酸适配体建立各种分析方法已引起许多科研工作者的关注。在本论文中，以结晶紫为荧光信号分子，凝血酶核酸适配体为识别探针，建立了检测凝血酶、Pb2+和Hg2+的非标记型荧光传感器。
本论文的主要研究内容和研究结果可归纳为以下三个方面：
一、非标记型凝血酶荧光传感器的研究
基于荧光探针信号的改变，以凝血酶核酸适配体为分子识别探针，构建了无需标记在均相溶液里检测凝血酶的荧光传感器。荧光探针即结晶紫，其自身的荧光信号很弱，当它与凝血酶适配体混合作用后，体系荧光信号增强。凝血酶适配体与凝血酶发生特异性地结合形成G-四链体后，结晶紫有部分脱落，体系荧光信号降低。根据体系荧光信号的改变，可在均相溶液里选择性地检测凝血酶，检出限约为 8×10-12 mol/L。通过圆二色光谱测定研究了凝血酶与其适配体作用前后构型的变化。该方法均无需标记核酸探针和目标物，具有简单易行、灵敏度高、选择性好的特点。
二、非标记型Pb2+荧光传感器的研究
基于荧光探针信号的改变，以凝血酶适配体为分子识别探针，构建了无需标记在均相溶液里检测Pb2+的荧光传感器。荧光探针即结晶紫，其自身的荧光信号很弱，当它与凝血酶适配体混合作用后，体系荧光信号增强。当加入Pb2+后，Pb2+诱导凝血酶适体形成G-四链体，使得结晶紫与凝血酶适配体作用减弱，体系荧光信号降低。根据体系荧光信号的改变，可在均相溶液里灵敏地检测Pb2+, 检出限约为 5×10-10 mol/L。通过圆二色光谱测定研究凝血酶适配体与Pb2+作用前后构型的变化。在合适的掩蔽剂存在条件下，传感器对Pb2+测定有良好的选择性。实际水样测定结果表明采用此方法所得结果与标准方法测定结果无显著性差异。该方法具有简单易行、灵敏度高的特点。
三、非标记型Hg2+荧光传感器的研究
基于荧光探针信号的改变，以凝血酶适配体为分子识别探针，构建了无需标记在均相溶液里检测Hg2+的荧光传感器。荧光探针即结晶紫，其自身的荧光信号很弱，当它与凝血酶适配体混合作用后，体系荧光信号增强。当加入Hg2+后，Hg2+能通过T-Hg2+-T错配使得凝血酶适配体形成发夹结构，结晶紫嵌插到双链部分，体系荧光信号进一步增强。根据体系荧光信号的改变，可在均相溶液里灵敏地检测Hg2+, 检出限约为 5×10-9 mol/L。通过圆二色光谱测定研究凝血酶适配体与Hg2+作用前后构型的变化。在合适的掩蔽剂存在条件下，传感器对Hg2+测定有良好的选择性。实际水样测定结果表明采用此方法所得结果与标准方法测定结果无显著性差异。该方法具有简单易行、灵敏度高的特点。
关键词：核酸适配体，结晶紫，荧光传感器