题目：珍稀濒危药用植物独叶草组织培养与内生真菌分离研究

独叶草(Kingdonia uniflora Balf. f. et W. W. Smith)为星叶草科(Circaeasteraceae)多年生小草本，为中国特有单种属植物，被列为国家Ⅰ级重点保护植物，具有重要的药用功效。独叶草种子在野外环境条件下大多不能成熟，主要依靠根状茎顶端伸长繁殖，在其苛刻的生存环境里，自然更新能力差，加之人为破坏森林植被和采挖，自然环境的突变等因素，其植株数量逐渐减少，自然分布区日益缩小。而其单一的繁殖方式又不能使其及时得到恢复。本实验通过对濒危药用植物独叶草组织培养的初步研究，以期为其野外种群数量扩大提供理论参考，从而为独叶草的保护开辟一条行之有效的途径。同时，为了促进独叶草在组织培养过程中快速生长，进行了独叶草内生真菌分离鉴定的初步研究。结果如下：
1. 独叶草离体再生体系的建立
在实验过程中，探讨了不同外植体消毒、不同基本培养基(MS、1/2MS、1/4MS、B5、N6、White)、不同激素种类、浓度及组合(不同生长素(NAA、2，4-D、IAA、IBA)、不同细胞分裂素(6-BA、KT、ZT、TDZ))、不同温度光照效应和不同外植体对独叶草生长和分化的具体作用。
（1）外植体消毒：通过用0.1%的升汞溶液和2%的次氯酸钠溶液对不同外植体在不同时间下消毒，发现根状茎用0.1%的升汞溶液消毒3min较合适，成熟叶片用2%次氯酸钠溶液消毒1min较合适，成熟叶柄用0.1%升汞溶液消毒1min或2min较合适，芽苞用0.1%升汞溶液消毒4min较合适。
（2）外植体诱导：通过不同基本培养基、不同激素种类、浓度及组合对不同外植体的培养，发现1/4MS是较合适的基本培养基；幼叶柄是最合适的外植体，可以诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，而根状茎、成熟叶柄、成熟叶片、芽鳞片和幼叶片的诱导率均为零；幼叶柄仅在含有激素2,4-D的培养基中可以诱导出愈伤组织，但该愈伤组织容易褐化死亡。
2. 独叶草内生真菌的分离鉴定
（1）独叶草根表面和内部结构的观察：采用扫描电子显微镜对独叶草根表面进行了观察，发现其根表面具有2个以上丝状物簇生区；通过徒手切片，乳酸石炭酸棉蓝染色，对独叶草根内部结构进行了显微观察，独叶草根表皮细胞内具有菌丝。
（2）通过两次分离，共得到5个菌株，根据菌落和菌丝特征、产孢结构、孢子形态等一系列鉴定，初步鉴定所得到的菌株主要属于子囊菌纲和半知菌类，其中半知菌类青霉属占优势。