题目：华中五味子果实HPLC指纹图谱研究

华中五味子（Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.）为五味子科（Schisandraceae）五味子属（Schisandra Michx）多年生藤本植物，其干燥成熟果实称为南五味子。其果实中含有丰富的木脂素成分，具有降酶保肝、保护中枢神经系统、抗衰老、抗肿瘤等作用。本研究以全国较大范围的18个华中五味子天然种群为研究对象，对华中五味子有效成分的提取工艺进行优化，对不同产地的五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素4种木脂素含量进行了分析，同时确定了最适宜的色谱分离条件，以五味子酯甲为主要参照峰，构建了华中五味子HPLC指纹图谱，并结合化学识别模式方法对其进行质量评价，以期为华中五味子药材的科学、客观、公正、有效的质量控制以及实现中药质量标准化奠定科学基础。
本文取得的主要研究成果如下：
1．采用正交试验法优化超声提取法提取华中五味子果实中木脂素成分的条件，结果表明五味子醇甲中各因素影响的主次顺序为料液比>溶剂>超声时间>提取次数，五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素中各因素影响的主次顺序为料液比>溶剂>提取次数>超声时间。但各因素对结果均无显著性影响。最佳提取条件为：料液比1：5的三氯甲烷溶液，超声提取一次，30 min。此方法对木脂素的提取率较高且操作简单。
2．不同产地华中五味子果实中各木脂素含量存在较大差异，含量测定与聚类分析结果表明18个产地的五味子酯甲含量均大于0.12 %，其中河南修武、河南卢氏、陕西柞水凤镇、陕西柞水营盘和陕西华县等产地的五味子酯甲含量均在0.670 %以上。各产地五味子醇甲含量除甘肃舟曲为0.605 %外，其余均较低，大多在0.006 %～0.023 %范围内；位于秦岭南侧、东侧以及太行山南侧的陕西营盘、陕西凤镇、河南修武、陕西华县等五味子酯甲与五味子甲素含量均较高，分别为0.688 %～0.910 %和0.583 %～1.013 %，而五味子乙素含量较低，为0.116 %～0.542 %；位于秦岭西侧以及四川盆地的甘肃舟曲、四川青川、重庆巫溪等五味子酯甲含量与五味子甲素含量较低，最高仅达0.289 %和0.334 %，但五味子乙素含量高，为0.874 %～1.489 %。
3．建立了华中五味子果实指纹图谱的高效液相色谱条件。色谱条件：色谱柱：岛津C18（150 × 4.6 mm，5 µm）；流动相：A水，B甲醇；梯度洗脱，0～20 min，45 %～65 % B；20～45 min，65 %～75 % B；45～50 min，75 % B；50～70 min，75 %～90 % B；流速0.8 mL/min；检测波长280 nm；柱温30 ℃；记录时间100 min；进样量8 µL。方法学考察表明方法可行、系统稳定，适用于华中五味子果实指纹图谱的建立，符合中药指纹图谱建立的技术要求。
4．构建了陕西、甘肃、河南、山西、安徽、浙江、四川、重庆等省市18个天然产地华中五味子的指纹图谱，以五味子酯甲为对照峰，从特征指纹峰图谱中确定了13个共有峰，其相对保留时间较稳定，相对峰面积差异比较大，说明不同产地华中五味子果实中木脂素成分存在一定的差异性。各产地指纹图谱相似度分析发现各产地指纹图谱存在一定差异，河南卢氏、浙江临安、陕西镇安产地相似度较低，其余产地相似度均在0.790以上，表明本文所建立的华中五味子指纹图谱具有特征性，能为不同产地华中五味子的鉴定提供一定的参考。指纹图谱数据及含量测定结果表明河南修武、陕西营盘、陕西凤镇、陕西旬阳、陕西华县等产地所产华中五味子药材质量较佳。本文确定出13个强峰为18批样品所共有，且共有峰峰面积占总峰的峰面积比值较大，可以作为华中五味子指纹图谱的特征峰，表明本文所建华中五味子指纹图谱具有相似性和专属性，并可构成华中五味子果实木脂素成分特有的指纹。
5．采用系统聚类分析、主成分分析和逐步判别分析方法对18个产地华中五味子果实指纹图谱进行化学模式识别研究。聚类结果将其分为四类，逐步判别分析的回判正确率达88.9 %，表明本文所建华中五味子HPLC指纹图谱可以用于不同产地华中五味子果实的质量控制。
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