题目：三叶木通藤茎HPLC指纹图谱及其果实有效成分的研究

摘 要
三叶木通（Akebia trifoliata(Thunb.) Koidz.）为木通科木通属落叶木质藤本植物，在我国有广泛的分布。其干燥藤茎可作为中药木通入药，药理研究证明，三叶木通中的有效成分主要为三萜皂苷类物质，其有效成分主要是常春藤皂苷元和齐墩果酸，在利尿抗水肿、抗菌消炎、抑制肿瘤细胞生长、保肝、降酶、提高机体免疫力等多方面均有潜在的开发应用价值。
本论文主要通过对供试品制备方法，检测波长，流动相系，梯度洗脱程序等进行优化，建立了三叶木通HPLC指纹图谱的测定方法，并且建立不同产地的HPLC指纹图谱，为三叶木通质量控制标准的建立提供依据。采用HPLC法对不同产地的预知子的有效成分含量进行了比较研究，并联系生态因子对其产生的含量差异进行了分析，为预知子的质量标准建立提供参考。实验的主要结果如下：
1.建立了三叶木通HPLC指纹图谱的测定方法。对供试品的制备方法和测定所用的色谱条件进行了优化，最终确定其制备方法为：精密称取0.5000g三叶木通粉末，分别加入70%的甲醇25 mL，超声提取45min。过滤，得滤液，旋转蒸干，分别加入10 mL水，20 mL甲醇，1 mL盐酸80℃水浴回流水解1h,旋转蒸干，加色谱甲醇定容于10ml容量瓶，摇匀，备用。最佳色谱条件为：色谱柱：Hibar C18 (250×4.6mm, 5 µm)；流动相：乙腈(A)，超纯水(B)，进行梯度洗脱，柱温：35℃，流速：0.8 mL /min，检测波长：210nm，进样量为20µL，洗脱时间为140min。???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????????????????????????
2.建立了陕西，湖北，贵州，甘肃四省26批三叶木通样品的指纹图谱，并根据其相对保留时间最终确定了14个共有峰。对图谱进行了相似度计算，发现湖北，贵州，甘肃这三省的三叶木通指纹图谱的相似度在0.90以上，陕西的样品与其他样品指纹图谱的峰面积差别较大，从而造成了相似度的降低。运用层级聚类计算这26批样品的相对峰面积的欧式距离，最终将这26批样品的图谱大致分成了3类。对精密度、稳定性进行了考察，结果表明：建立三叶木通指纹图谱所用的方法可行，系统稳定，所建立的指纹图谱符合中药指纹图谱建立的技术要求，可为三叶木通质量标准的建立提供参考。
3．以不同产地的三叶木通的果实为材料，运用HPLC法测定了其中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量。不同产地之间的样品之间有效成分的含量存在较大差异。其有效成分总含量由高到低依次为：陕西镇安、陕西沣峪口、湖北松柏、湖北房县、湖南慈利、湖南石门、贵州施秉、贵州镇远。对试验的进行了方法学考察，所得精密度、稳定性、重现性和加样回收率的RSD值均小于3.0%，试验系统稳定，方法可靠。通过SPSS16.0软件对不同生态因子作散点图分析生态因子与预知子中常春藤皂苷元的线性关系，确定影响其含量的主导因子，并对这些主导因子纬度X1、年日照数X2、年平均气温X3、进行多元逐步回归分析，建立多元回归方程：Y=0.305+0.870X1+0.033X2-0.115X3(R2=0.987,P＜0.01)，得出常春藤皂苷皂苷元的含量随着日照数和纬度的增加预知子中常春藤皂苷元的含量增加，随着年平均气温的加大预知子中常春藤皂苷元的含量减少。
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关键词：三叶木通，指纹图谱，预知子，果实，高效液相色谱法