题目：从中药中高通量筛选P-糖蛋白抑制剂的研究

目的: 肿瘤是威胁人类健康的主要疾病之一，化疗是治疗肿瘤的最主要手段。然而肿瘤细胞多药耐药性(multidrug resistance，MDR)的产生是目前肿瘤化学治疗失败的一个主要原因。如何逆转多药耐药成为提高化疗疗效的亟待解决的问题。导致MDR的原因很多，其中以P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药研究最为深入。目前对于肿瘤多药耐药逆转剂的开发多是以P-糖蛋白作为靶标。本实验制备多种中药的提取物，利用Caco-2细胞高表达P-糖蛋白的特点，建立Caco-2细胞高通量筛选模型，从不同中药提取物中筛选能有效抑制P-糖蛋白“外泵”作用的药物。并对几种阳性药物对P-糖蛋白的抑制作用进行初步验证。
方法：⑴培养Caco-2细胞，以Rho-123为荧光探针，建立高通量筛选P-糖蛋白中药抑制剂的Caco-2细胞模型。并通过检测细胞内Rho-123荧光蓄积量的变化初步筛选出抑制P-糖蛋白的阳性中药；
????? ⑵将初筛得到的几种阳性中药提取物对P-糖蛋白抑制作用进行验证：Rho-123蓄积实验评价药物对P-糖蛋白“外泵”功能的抑制作用（采用多功能酶标仪和流式细胞仪两种检测手段）；MTT法检测药物与ADM联合作用后对细胞增殖的影响；用流式细胞术检测药物对细胞内ADM蓄积量的影响。
结果：⑴建立了从中药中高通量筛选P-糖蛋白抑制剂的Caco-2细胞模型，从17种中药提取物中初步筛选P-糖蛋白抑制剂，并确定以L1、D2、S3提取物为研究对象进行后续实验研究；
????? ⑵通过MTT法发现不同的浓度L1、D2、S3提取物作用于Caco-2细胞后，细胞抑制率随浓度的提高而增加，而且当L1、D2提取物在浓度﹤0.125µg/mL、S3提取物在浓度﹤0.0625µg/mL时，不会对细胞增殖产生显著影响，为非细胞毒性剂量。
????? ⑶Rho-123蓄积实验证明L1、D2、S3提取物可增加细胞内Rho-123的荧光强度。通过多功能酶标仪检测发现，随着中药提取物浓度的升高，细胞内的荧光强度也随之增加，当L1、D2浓度为62.5ng/mL、125ng/mL时，可显著的增加细胞内Rho-123的蓄积（P﹤0.05），S3在31.25ng/mL、62.5ng/mL浓度下，可极显著的增加细胞内Rho-123的蓄积（P﹤0.01）。流式细胞仪检测显示125ng/mL 的L1、D2提取物作用后细胞内Rho-123的荧光强度与阴性相比显著的增强，62.5ng/mL浓度的S3也可增加细胞内Rho-123荧光强度。
????? ⑷MTT法检测发现62.5ng/mL、125ng/mL的L1、D2，31.25、62.5ng/mL S3提取物与抗癌药物ADM联合作用后可显著的增加ADM对细胞增殖的抑制作用，增加化疗敏感性。
⑸125ng/mL的L1、D2, 62.5ng/mL 的S3提取物与细胞作用后使细胞内ADM蓄积量增加。


结论: ?Caco-2细胞模型是一种可高通量筛选P-糖蛋白中药抑制剂的有效模型。L1、D2、S3提取物对Caco-2细胞的P-糖蛋白有显著的抑制作用，可显著的提高Caco-2细胞对抗癌药物的敏感性。提示L1、D2、S3可能为P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药的有效逆转剂。
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关键词：多药耐药，P-糖蛋白，Caco-2细胞，中药