题目：柿子皮乙醇提取物的体外抗氧化活性研究

活性氧（ROS）的不平衡产生与消除所导致的氧化损伤牵扯着许多疾病，例如，癌症、动脉硬化、疟疾、风湿性关节炎以及神经组织退化疾病和衰老。一些研究表明，人们日常水果和蔬菜的消耗量与慢性病的发生呈负相关。而水果和蔬菜的这种保护效应早已归因于它们含有的抗氧化成分，例如多酚、类胡萝卜素、维生素C、维生素E。除了在生理方面扮演重要作用外，抗氧化剂在食品工业中常被用来延长食品的储存期，特别是那些富含有多不饱和脂肪酸食品。一些合成抗氧化剂（如BHA、BHT）已广泛应用于食品工业来控制食品中脂质的氧化。但是，由于其潜在危险性和毒性，这些合成的抗氧化剂的使用被人们所质疑。因此，人们高度关注天然来源的抗氧化剂，迫切寻找合适的天然抗氧化剂来代替合成的抗氧化剂。
柿子（Diospyros kaki）在日本、韩国、中国、巴西、意大利等国广泛栽培。它包含有很多生物活性成分，如多酚、黄酮、萜类化合物、类固醇、饮食纤维、类胡萝卜素和矿物质。在中国，柿果和柿叶传统上被用于医疗方面，如咳嗽、过度紧张、呼吸困难、麻痹、冻疮、烧伤及出血，也有抗氧化和清除自由基效应的报道。柿子皮中的多酚类物质含量高于果肉，但是通常在柿产品加工过程中被丢弃，而且关于柿子皮活性成分抗氧化活性的研究报道很少。因此，本课题选用柿子皮作为研究材料，通过测定柿子皮提取物（persimmon peel extracts，PPE）中主要有效成分及抗氧化活性，为柿子皮作为天然抗氧化剂原料的开发和利用提供实验依据。首先，采用了回流萃取法提取柿子皮有效成分，经浓缩后用DA201大孔吸附树脂初步纯化，并对纯化前后的提取物进行了有效成分含量测定，然后，采用体外化学模拟体系对提取物的抗氧化活性和对鼠肝线粒体的保护作用进行了研究。实验主要分三部分进行：
第一部分：PPE的制备及其活性成分含量测定，包括总糖、多酚、总黄酮。
第二部分：采用常用的几种体外抗氧化体系，包括清除自由基（DPPH·、O2-·和·OH）、还原力、总抗氧化力和抑制脂质过氧化，研究柿子皮提取物体外抗氧化活性。
第三部分：通过实验构建鼠肝线粒体自由基损伤体系，评价柿子皮提取物对肝线粒体保护作用，主要测定PPE抑制线粒体脂质过氧化、抑制线粒体肿胀度和抑制蛋白氧化、清除线粒体中O2-·及保护ATPase的活性。
主要实验结果如下：
1．PPE的制备：用70％乙醇，以料液比1﹕10，在80℃提取2 h（2次），并50℃浓缩得粗提物记为PPE0，再经大孔吸附树脂纯化（记为PPE1），得率分别为18.10％、2.17％。PPE0和PPE1活性成分含量测定结果，发现经纯化后的PPE1中黄酮（25.85％）、多酚（47.05％）纯度较PPE0提高4倍多，而总糖（15.63％）降低三倍。表明大孔吸附树脂对黄酮和多酚有较好的纯化效果。
2．PPE的外抗氧化：通过几种体外抗氧化评价方法，发现PPE具有明显的清除自由基能力，特别是PPE1表现更为明显，其清除DPPH·、O2-· 和·OH的IC50分别0.057 mg/mL、0.137 mg/mL、0.425 mg/mL，另外，PPE表现出一定的还原力、抑制脂质过氧化能力和总抗氧化能力，结果与自由基清除能力类似。通常认为提取物抗氧化能力与其含有的黄酮及多酚量密切相关。
3．PPE1对鼠肝线粒体损伤的保护作用：在本研究中，发现PPE1能有效保护肝线粒体膜脂质过氧化和清除O2-·能力，IC50分别是0.083 mg/mL、0.119 mg/mL；另外，PPE1可保护线粒体ATP酶活性、抑制线粒体肿胀和蛋白氧化，且有剂量依赖性。PPE1对肝线粒体的保护作用可能由于其能清除O2-·，阻断脂质自由基链式反应，抑制膜渗透性改变，和降低蛋白羰基的产生。
总之，本研究结果表明，PPE具有明显的抗氧化活性和对鼠肝线粒体损伤保护作用，说明了柿子皮可以作为开发新型抗氧剂的原料，而不是被简单地用作饲料，或被废弃。é