题目：均相电化学发光测定凝血酶新方法的研究

电化学发光是在电极上施加一定的电压使电极反应产物之间或电极反应产物与溶液中某组分之间进行化学反应而产生的一种光辐射。根据电化学发光的强度进行的分析方法称为电化学发光分析法。电化学发光法兼有电化学和化学发光法的双重优点，具有较低的检测限、较宽的线性范围等优点；相对于荧光法，无光漂白，不需要光源和分光系统；相对于电化学检测，具有检测限低和受电极污染影响小的优点。
结合均相电化学发光免疫分析方法具有的简单、快速的特点和适体对目标分子高亲和力、高特异性的特点，本实验小组已建立了以钌联吡啶衍生物为电化学发光信号物质的均相电化学发光适体分析方法，该方法基于信号降低原理检测目标物凝血酶，存在背景信号大，灵敏度不易降低，而且钌联吡啶衍生物激发电位高等缺点。本论文的目的是探索研究以异鲁米诺为电化学发光信号物质，建立信号增强型均相适体电化学发光分析方法，期望实现在较低激发电位下灵敏的检测目标物质。本论文研究工作是在国家自然科学基金“电化学发光适体生物传感器”（No. 20775046）项目的资助下完成的。
本论文由综述和研究报告两部分组成。第一部分为综述，系统的介绍了电化学发光的原理、机理及特点，重点介绍了ECL反应类型及其分析应用；简要介绍了适体的筛选及特点，综述了适体生物传感器的研究进展、电化学发光适体生物传感器的研究进展及DNA和适体标记方法的研究进展，并对本论文的研究目的和研究内容进行了阐述。
第二部分为研究报告。研究报告由两部分组成。以异鲁米诺为电化学发光物质，以凝血酶适体作为分子识别物质，选择两种不同的标记方法，分别合成了异鲁米诺标记5′端修饰磷酸基的凝血酶适体的电化学发光探针和5′端修饰巯基的凝血酶适体的电化学发光探针。异鲁米诺标记适体分子与凝血酶结合后，异鲁米诺刚性结构的增加导致电化学发光信号的增强，利用异鲁米诺标记适体分子与凝血酶结合前后电化学发光信号的变化，建立了简单、灵敏、信号增强型的凝血酶均相适体电化学发光分析方法。
研究报告的第一部分，以异鲁米诺为电化学发光物质，以凝血酶适体作为分子识别物质，合成了异鲁米诺标记5′端修饰磷酸基的凝血酶适体的电化学发光探针，考察了该电化学发光探针的电化学和电化学发光行为。基于凝血酶与电化学发光探针结合前后电化学发光信号的变化，建立了检测凝血酶的电化学发光分析法。实验结果表明，异鲁米诺标记5′端修饰磷酸基的凝血酶适体的电化学发光分析法中，电化学发光强度与目标物凝血酶的浓度的负对数在2.52×10-14 ~ 2.52×10-11 mol/L范围内成线性关系，检出限为8×10-15 mol/L，对2.52×10-12 mol/L 浓度的凝血酶进行11次测定，相对标准偏差为5.9%。
研究报告的第二部分，改进了异鲁米诺标记适体的方法，合成了异鲁米诺标记5′端修饰巯基的凝血酶适体探针，考察了该电化学发光探针的电化学和电化学发光行为。实验结果表明，该探针电化学发光性质优于异鲁米诺标记5′端修饰磷酸基的凝血酶适体探针。电化学发光探针结合前后电化学发光信号强度的变化与凝血酶浓度的负对数在1.0×10-13 ~ 1.0×10-11 mol/L范围内成线性关系，检出限为5×10-14 mol/L，对5.0×10-12 mol/L 浓度的凝血酶进行11次测定，相对标准偏差为2.3%。
本论文为建立简单、快速的蛋白质电化学发光分析新方法提供了一种思路，对蛋白质的临床检测方法学研究具有一定的促进作用。