题目：高效液相色谱–固定化试剂化学发光检测的研究及其应用

高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC)是一种快速、高效而且应用广泛的现代分离分析技术。充当着“眼睛”角色的HPLC检测器是HPLC系统的重要组成部分之一。近年来，在众多的HPLC检测器当中，化学发光检测器(CLD)因为拥有高的灵敏度，宽的线性范围以及简单的仪器设备等优点，被广泛地应用于各种复杂样品中pg或fg级含量化合物的检测。HPLC和CL联用已经发展成为一种理想的分离分析方法，也是当今分析科学领域内研究非常活跃的热点之一。
固定化试剂化学发光(Chemiluminescence with immobilized reagents)法是将化学发光体系中的全部或部分试剂固定化，从而使得测定体系拥有操作简便、仪器简化以及节省试剂等优点，目前已用于流动注射化学发光分析方法。研究化学发光试剂的固定化可以为开发各种用途的化学发光传感器创造条件。本研究在完成固定化柱的设计、优化色谱分离和化学发光检测器条件的基础上，提出了一种灵敏度高、选择性好的HPLC–CL检测新方法，为高效液相色谱增添了一种新的具有高灵敏度的检测器；并将这一新的固定化试剂化学发光检测器应用于实际样品如豆芽中植物生长素、人血清某些药物的检测。现就HPLC–CL检测技术的研究进展情况(第1章)和具体研究工作(第2章)简述如下：
第1章为综述，主要就HPLC–CL检测技术的基本原理、系统构建、近年来化学发光技术在色谱柱后检测中的应用和进展情况以及液相化学发光中固定化方法进行了评述。
第2章为研究报告，包括如下三个部分：
(一) 高效液相色谱固定化Ru(bpy)32+–KMnO4化学发光法测定豆芽中的吲哚乙酸(Indole–3–acetic acid,IAA)和吲哚丁酸(Indole–3–butyric acid,IBA)
研究发现，当吲哚乙酸(Indole–3–acetic acid, IAA)或吲哚丁酸(Indole–3–butyric acid, IBA)、酸性高锰酸钾以及固定化的钌联吡啶一起混合后将产生强烈的化学发光。基于此提出了一个经高效液相色谱(HPLC)分离柱后同时检测豆芽中吲哚乙酸和吲哚丁酸的化学发光检测的新方法。色谱分离以Nucleosil RP–C18(i.d.:250×4.6 mm, 德国)为色谱柱，甲醇–水–醋酸(45:55:1, v/v/v)为流动相，在流速为1.0 mL/min时，同时分离检测吲哚乙酸和吲哚丁酸的总时间少于20 min。在最优化的实验条件下，该方法测定吲哚乙酸和吲哚丁酸线性范围分别为5.0×10–8 g/mL–5.0×10–6 g/mL和5.0×10–7 g/mL–1.0×10–5 g/mL；检出限(LOD)(3σ)分别为0.02 μg/mL和0.2 μg/mL。对含2种植物生长素浓度均为2×10– 6 g/mL的样品溶液连续进行11次平行测定的相对标准偏差(R.S.D.)分别为3.1% 和2.3%，其日间精密度(R.S.D.)为6.9% 和4.9%。该方法己成功应用于豆芽中吲哚乙酸和吲哚丁酸含量的分析。
(二) 高效液相色谱固定化Ru(bpy)32+–KMnO4化学发光法测定血清中的瑞格列奈(Repaglinide)
研究发现，瑞格列奈(Repaglinide)、酸性高锰酸钾以及固定化的钌联吡啶一起混合后将会产生强烈的化学发光。基于此提出了一种经高效液相色谱(HPLC)分离柱后检测人血清中的瑞格列奈的化学发光检测的新方法。色谱分离以Nucleosil RP–C18(i.d.: 250×4.6 mm, 德国)为色谱柱，甲醇–0.01 mol/L磷酸缓冲溶液(pH=3)(75:25, v/v)为流动相，在流速为1.0 mL/min时，同时分离检测瑞格列奈的总时间少于6 min。在优化的实验条件下，该方法测定瑞格列奈线性范围为4.0×10–8 g/mL–1.0×10–5 g/mL；检出限(LOD)(3σ)为2.0×10–8 g/mL。对含瑞格列奈浓度为1.0×10– 7 g/mL的样品溶液连续进行11次平行测定的相对标准偏差(R.S.D.)为3.1%。该方法己成功应用于人血清中瑞格列奈含量的分析。
(三) 高效液相色谱化学发光法测定血清中左羟丙哌嗪(Levodropropizine)
在硫酸介质中，高锰酸钾氧化左羟丙哌嗪(Levodropropizine)产生化学发光，甲醛可增敏上述化学发光，在此基础上建立了反相高效液相色谱(RP–HPLC)分离，柱后化学发光检测左羟丙哌嗪的新方法，并成功应用于血清中左羟丙哌嗪的测定。在优化的实验条件下，该法测定左羟丙哌嗪的线性范围为1.0×10–7 g/mL–1.0×10–5 g/mL，检出限(3σ)为3×10–8 g/mL。对2.0×10– 6 g/mL的左羟丙哌嗪进行11次平行测定，其相对标准偏差(R.S.D.)为2.3%。
高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC)是一种快速、高效而且应用广泛的现代分离分析技术。充当着“眼睛”角色的HPLC检测器是HPLC系统的重要组成部分之一。近年来，在众多的HPLC检测器当中，化学发光检测器(CLD)因为拥有高的灵敏度，宽的线性范围以及简单的仪器设备等优点，被广泛地应用于各种复杂样品中pg或fg级含量化合物的检测。HPLC和CL联用已经发展成为一种理想的分离分析方法，也是当今分析科学领域内研究非常活跃的热点之一。
固定化试剂化学发光(Chemiluminescence with immobilized reagents)法是将化学发光体系中的全部或部分试剂固定化，从而使得测定体系拥有操作简便、仪器简化以及节省试剂等优点，目前已用于流动注射化学发光分析方法。研究化学发光试剂的固定化可以为开发各种用途的化学发光传感器创造条件。本研究在完成固定化柱的设计、优化色谱分离和化学发光检测器条件的基础上，提出了一种灵敏度高、选择性好的HPLC–CL检测新方法，为高效液相色谱增添了一种新的具有高灵敏度的检测器；并将这一新的固定化试剂化学发光检测器应用于实际样品如豆芽中植物生长素、人血清某些药物的检测。现就HPLC–CL检测技术的研究进展情况(第1章)和具体研究工作(第2章)简述如下：
第1章为综述，主要就HPLC–CL检测技术的基本原理、系统构建、近年来化学发光技术在色谱柱后检测中的应用和进展情况以及液相化学发光中固定化方法进行了评述。
第2章为研究报告，包括如下三个部分：
(一) 高效液相色谱固定化Ru(bpy)32+–KMnO4化学发光法测定豆芽中的吲哚乙酸(Indole–3–acetic acid,IAA)和吲哚丁酸(Indole–3–butyric acid,IBA)
研究发现，当吲哚乙酸(Indole–3–acetic acid, IAA)或吲哚丁酸(Indole–3–butyric acid, IBA)、酸性高锰酸钾以及固定化的钌联吡啶一起混合后将产生强烈的化学发光。基于此提出了一个经高效液相色谱(HPLC)分离柱后同时检测豆芽中吲哚乙酸和吲哚丁酸的化学发光检测的新方法。色谱分离以Nucleosil RP–C18(i.d.:250×4.6 mm, 德国)为色谱柱，甲醇–水–醋酸(45:55:1, v/v/v)为流动相，在流速为1.0 mL/min时，同时分离检测吲哚乙酸和吲哚丁酸的总时间少于20 min。在最优化的实验条件下，该方法测定吲哚乙酸和吲哚丁酸线性范围分别为5.0×10–8 g/mL–5.0×10–6 g/mL和5.0×10–7 g/mL–1.0×10–5 g/mL；检出限(LOD)(3σ)分别为0.02 μg/mL和0.2 μg/mL。对含2种植物生长素浓度均为2×10– 6 g/mL的样品溶液连续进行11次平行测定的相对标准偏差(R.S.D.)分别为3.1% 和2.3%，其日间精密度(R.S.D.)为6.9% 和4.9%。该方法己成功应用于豆芽中吲哚乙酸和吲哚丁酸含量的分析。
(二) 高效液相色谱固定化Ru(bpy)32+–KMnO4化学发光法测定血清中的瑞格列奈(Repaglinide)
研究发现，瑞格列奈(Repaglinide)、酸性高锰酸钾以及固定化的钌联吡啶一起混合后将会产生强烈的化学发光。基于此提出了一种经高效液相色谱(HPLC)分离柱后检测人血清中的瑞格列奈的化学发光检测的新方法。色谱分离以Nucleosil RP–C18(i.d.: 250×4.6 mm, 德国)为色谱柱，甲醇–0.01 mol/L磷酸缓冲溶液(pH=3)(75:25, v/v)为流动相，在流速为1.0 mL/min时，同时分离检测瑞格列奈的总时间少于6 min。在优化的实验条件下，该方法测定瑞格列奈线性范围为4.0×10–8 g/mL–1.0×10–5 g/mL；检出限(LOD)(3σ)为2.0×10–8 g/mL。对含瑞格列奈浓度为1.0×10– 7 g/mL的样品溶液连续进行11次平行测定的相对标准偏差(R.S.D.)为3.1%。该方法己成功应用于人血清中瑞格列奈含量的分析。
(三) 高效液相色谱化学发光法测定血清中左羟丙哌嗪(Levodropropizine)
在硫酸介质中，高锰酸钾氧化左羟丙哌嗪(Levodropropizine)产生化学发光，甲醛可增敏上述化学发光，在此基础上建立了反相高效液相色谱(RP–HPLC)分离，柱后化学发光检测左羟丙哌嗪的新方法，并成功应用于血清中左羟丙哌嗪的测定。在优化的实验条件下，该法测定左羟丙哌嗪的线性范围为1.0×10–7 g/mL–1.0×10–5 g/mL，检出限(3σ)为3×10–8 g/mL。对2.0×10– 6 g/mL的左羟丙哌嗪进行11次平行测定，其相对标准偏差(R.S.D.)为2.3%。