题目：蚕蛹蛋白活性多肽的酶法制备

蚕蛹是蚕业生产的主要副产物。我国是蚕业生产大国，产丝量占世界总产量的80%左右。蚕蛹蛋白是一种优质蛋白质资源，干蚕蛹中蛋白质含量在60％以上，含有18种氨基酸，其中8种人体必需氨基酸含量是氨基酸总量40％左右，且其氨基酸组成平衡合理，营养价值较高。我国是发展中国家，居民营养状况不平衡，既存在人均摄入蛋白质和量不足的矛盾，也存在肥胖症、糖尿病、高血压、高血脂、心血管等饮食性疾病高发的矛盾。因此充分利用蚕蛹优质蛋白质资源，开发具有多种生物功能的活性多肽十分必要。
本文以陕西安康产的蚕蛹为原料，主要从以下几个方面对蚕蛹蛋白及蚕蛹多肽生物学活性进行了研究，研究成果如下：
一、选用5种不同的溶剂作为提取剂，采用索氏提取法提取蛹油制备脱脂蚕蛹粉。结果表明选用石油醚作为脱脂溶剂，其出油率较高，达到27.5%，得到的蛹油品质较好。对得到的脱脂蚕蛹蛋白粉进行氨基酸测定，氨基酸总含量为63.69%，其中必需氨基酸含量达到25.22%，占氨基酸总含量的39.6%。
二、采用二次回归正交旋转组合设计，以碱溶酸沉法提取蚕蛹蛋白。得到蚕蛹蛋白的最优提取工艺条件为pH10，料液比（W/V）为1：12，提取温度为60℃；在此条件下，提取时间为90 min，蚕蛹蛋白提取率达到48.22%，对其进行冷冻干燥后，得到灰白色基本无异味的蚕蛹蛋白粉，蛋白含量达到95.2%。
三、通过对Alcalase，Flavourzyme，Protamex，木瓜蛋白酶，胰蛋白酶五种蛋白酶对脱脂蚕蛹蛋白粉进行酶法水解制备多肽研究，以水解度和多肽水解产物清除DPPH·能力为考察指标。结果表明Alcalase蛋白酶对蚕蛹蛋白具有较好的水解效果，其水解产物具有较强的抗氧化活性。
四、利用正交试验设计法，以蚕蛹蛋白水解度为指标，得到最佳酶解制备活性多肽的工艺条件为底物浓度为4%，Alcalase酶用量（E/S）为2%，水解温度为60℃，pH值为8.0。在此条件下，水解4h，水解产物对DPPH·、·O2-和·OH具有较好的清除能力。
五、通过对对水解产物超滤分离，得到活性成分主要为分子量小于5KDa的多肽，其清除DPPH自由基能力和ACE抑制活性最强，得率最高。经Sephadex G-25柱层析法测定活性多肽分子量在1200Da左右，该多肽主要由9～10个氨基酸组成。