题目：脱脂沙苑子乙醇提取物的体外抗氧化活性研究

合成抗氧化剂（如BHA和BHT）大多数为芳胺或苯酚类，大多通过阻断链式反应机理发挥抗氧化作用，因其具有一定的毒性和致癌作用，限制了这些物质的使用。因此，开发廉价、高效、安全无毒的天然抗氧化剂成为众多研究者关注的热点之一。沙苑子为豆科植物扁茎黄芪（Astragalus complanatus）的干燥成熟种子，是一味补益肝肾的传统中药，广泛分布在东北、华北和西北。沙苑子黄酮是沙苑子的主要活性成分，具有抗衰老、降脂保肝、抑制血小板聚集、增强免疫功能及调节中枢神经系统等作用。目前已有一系列沙苑子保健食品上市。尽管已有报道证明沙苑子有清除超氧阴离子能力，但至今尚无沙苑子体外抗氧化活性的系统研究，因此本文首次系统研究沙苑子提取物的体外抗氧化活性，以期进一步揭示沙苑子的药理作用机制，促进沙苑子中药资源的开发利用。
本研究主要分三大部分：
第一步，制备脱脂沙苑子乙醇提取物（the defatted ethanolic extract from Semen Astragali Complanati，ESA），并采用分光光度法测定主要化学成分总糖、总黄酮、总多酚的含量。
第二步，通过构建体外化学体系，包括β-胡萝卜素/亚油酸自氧化体系、还原能力测定、DPPH·/ O2-·/·OH三种自由基清除体系及Fe2+诱导的脂质过氧化反应，研究ESA的体外抗氧化活性。
第三步，研究ESA对·OH诱导的线粒体氧化损伤的保护活性。研究按照以下操作进行：采用0.25 M蔗糖溶液提取、差速离心法制备大鼠肝线粒体，利用 Fe2+/Vc或 Fe2+/H2O2系统产生·OH诱导大鼠肝线粒体损伤，测定ESA对肝线粒体肿胀程度、脂质过氧化和蛋白质羰基生成水平的抑制作用，特别是对ATP酶活性以及超氧阴离子的生成的影响。
研究结果表明：
1、干燥的沙苑子经提取得到ESA，得率为6.73%，ESA中主要成分为糖类、黄酮类、多酚类物质，其含量分别为44.92%、7.47%和14.24%。
2、ESA具有很强的清除自由基的能力，均呈现剂量依赖性效应，但在不同的体系中机制不同。其清除DPPH·、O2-·、·OH三种自由基的IC50依次为419.1µg/mL、117.9 µg/mL和224.4 µg/mL，其清除超氧阴离子的作用最强、羟基次之、DPPH·最差。
3、ESA有较强的还原力，且与浓度呈正相关。4.2 mg/mL的ESA相当于160 µg/mL的Vc和300 µg/mL的BHT的还原力。对β-胡萝卜素褪色有明显的抑制作用，150 µg/mL、600 µg/mL、1200 µg/mL的ESA强于50 µg/mL的Vc的总抗氧化力。能较好的抑制Fe2+诱导的不饱和脂质的过


氧化反应，IC50为1.7 mg/mL。
4、ESA可以有效地抑制·OH诱导的线粒体肿胀、脂质过氧化和蛋白质羰基的生成，通过减少超氧阴离子自由基的生成和提高ATP酶活性，保护线粒体免受羟基诱导的氧化损伤。
5、ESA的抗氧化活性可能是沙苑子黄酮、多酚和多糖类综合作用的结果。
总之，ESA具有很强的体外抗氧化活性。其可能的作用机制为通过直接清除自由基或者供氢、供电子作用消除活性自由基而中断自由基链式反应，或保护线粒体免受氧化损伤。沙苑子提取物具有比Vc更好的稳定性，与比合成抗氧化剂更大的安全性，说明其具有可开发为天然抗氧化剂的潜在优势。