题目：中草药活性成分筛选模型建立及应用

随着国民生活水平的不断提高，人们对健康水平和生活质量的要求也在不断地提高，寻找、研究和开发效果优良、安全可靠的药物一直成为药物研究的重要课题。本论文从化学成分和细胞生物学层面分析了中草药的活性成分，建立了筛选中枢神经系统疾病和心血管疾病药物的模型，并对丹参脂溶性、丹参水溶性、大黄脂溶性和铁棒锤生物碱的提取物进行了活性化合物的筛选、分析和鉴定研究，为中药现代化研究提供了新的研究思路。
本论文的主要研究内容有：
一、体外血脑屏障 (BBB)筛选模型的建立及BBB-LC-MS技术的应用
1. 血脑屏障 (BBB)筛选模型的建立
中枢神经系统对外界相对封闭，具有免受多种物质影响的独特结构，致使许多药物不能进入中枢神经系统发挥作用，利用体外血脑屏障 (BBB)模型可筛选出能够作用于中枢神经系统的活性化合物。本论文用ECV304/C6共培养模式来模拟体内血脑屏障建立药物筛选模型，通过跨膜电阻、渗透系数和形态学分析证明，ECV304细胞在C6细胞诱导下所建模型具有体内血脑屏障的特点。
2. 应用BBB模型从丹参提取物中筛选活性成分
应用所建BBB模型，从丹参脂溶性、丹参水溶性提取物中筛选能够通过血脑屏障的活性化合物，并进一步应用LC-MS技术对筛选出来的候选药物进行分析和鉴定。研究结果表明，丹参中至少有16个候选药物能够通过血脑屏障，其中鉴定的4个候选药物分别是隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参素和原儿茶酸；采用定量构效关系 (QSAR)分析、预测鉴定出来的候选药物的分子参数，表明化合物符合通过血脑屏障化合物的特征，进一步证明利用BBB-LC-MS技术可从中草药提取物中筛选出通过血脑屏障的活性化合物，该技术有助于指导CNS靶点新药的筛选和开发。
3. 应用BBB模型从大黄提取物中筛选活性成分
应用BBB模型筛选，LC-MS分析大黄脂溶性成分，3个可通过BBB的活性化合物结构被确定；采用定量构效关系 (QSAR)分析、预测鉴定出来的候选药物的分子参数，表明所筛选的化合物符合通过血脑屏障化合物的特征。
二、细胞亲和捕获 (CAS)药物筛选模型的建立以及CAS-LC-MS技术的应用
1. 细胞亲和捕获 (CAS)药物筛选模型的建立
以筛选活性化合物为目的，设计了从中草药中筛选治疗心血管疾病的活性化合物的新方法——细胞亲和筛选 (cell affinity screening, CAS)。该方法是利用氧化损伤人脐静脉内皮细胞上的效应靶点与中草药中活性成分特异性的结合，首先将中草药提取物与内皮细胞作用，使活性成分结合，然后洗掉未被结合的成分，再通过细胞膜受体失活的方式，使与细胞受体特异性结合的成分解离下来，应用液质联用技术分析鉴定所筛选的活性成分。
2. 丹参提取物中可与心血管疾病相关的活性化合物筛选分析
将CAS-LC-MS技术应用于丹参水溶性、丹参脂溶性提取物中治疗心血管疾病的活性成分筛选。结果表明，丹参中有19个活性成分能被人脐静脉内皮细胞受体特异性结合并捕获。其中已鉴定的7个化合物均有文献报道与心脑血管疾病相关；然后对鉴定的7个化合物的HPLC分析特性和模型筛选特性进行了研究。
3. 大黄提取物中可与心血管疾病相关的活性化合物筛选分析
将CAS-UPLC-MS技术应用于大黄脂溶性提取物中活性化合物筛选，结果研究表明，大黄脂溶性提取物中有5个化合物与氧化损伤ECV304细胞受体特异性结合，其中已鉴定的4个化合物中的3个已有文献报道与心血管疾病相关，然后对鉴定的4化合物的HPLC分析特性和模型筛选特性进行了研究。
4. 铁棒锤提取物中可与心血管疾病相关的活性化合物筛选分析
应用所建的CAS模型，从铁棒锤生物碱提取物中筛选与心血管疾病相关的活性化合物，研究结果表明，铁棒锤生物碱提取物中有5个化合物被人脐静脉内皮细胞受体特异性结合并捕获，然后对已鉴定出的新乌头碱和乌头碱的HPLC分析特性进行了研究。已知乌头碱是诱发心血管疾病的经典药物，说明CAS模型只能筛选与心血管疾病相关的活性成分，其筛选出的化合物的生理活性需要进一步的考察研究。