题目：酶抑制-电位法对主要水果蔬菜农药残留现场快速检测方法研究

有机磷和氨基甲酸酯类农药是最常见的两类农药，其杀虫活性高，应用范围广，但对人畜有急性毒性作用，因此它是食品安全检测中的一个重要项目。虽然政府明令禁止将有机磷和氨基甲酸酯类农药中的高毒、剧毒品种用于蔬菜果品的生产，但是根据各地调查，不少地方仍在使用这些国家明确规定在蔬菜上禁用的高毒剧毒农药，因食用含大量农残的蔬菜所引起的人畜中毒事件时有发生，带来了严重的食品安全问题。
目前，用于有机磷及氨基甲酸酯类农药的检测方法主要是气相色谱法，此种方法具有较高的准确度和灵敏度，但是需要大型仪器，操作复杂，不适合现场的快速检测。快速检测方法也有多种，各有长处和不足。目前对于农残快速检测的研究，以酶抑制法较多，本文对几种酶抑制法进行了比较研究，确定了植物酯酶电位法的现场检测方法，并且对现场检测的影响因素进行了研究。研究结果如下：
（1） 对植物酯酶电位法、比色法、固定化酶片法等现场快速检测方法进行了比较：在被检测的六种农药中，电位法对六种农药检测的变异系数在2.34-3.56之间，最低检测限(LOD)在0.008-0.156（mg/Kg）之间同比均优于其他两种检测方法。
（2） 对电位法进行了优化：以本室制备的植物酯酶为检测用酶，取4mL 50倍稀释的原酶液，加检样或农药2mL，对照管加水，在25℃水浴下抑制15min，然后加入0.5%α-乙酸萘酯（底物）1.4mL，立即测pH值（pH1），然后放于40℃的水浴中反应30min后，然后放于25℃水浴中10min后，测其pH值（pH2）。以农药浓度的负对数对酶的抑制率作图建立标准工作曲线，以测得样品的对酶抑制率计算农药浓度。
（3） 对植物酯酶电位法和乙酰胆碱酯酶比色法进行了比较，结果表明：在相同的检测浓度下，对农药对酶抑制程度的检测中，植物酯酶电位法和乙酰胆碱酯酶比色法无明显差异。
（4） 对水果蔬菜前处理影响因素的研究，并确定了前处理的方法：确定了最佳超声时间为8min，最佳提取溶剂为甲醇:丙酮:乙酸乙酯（1:2:3）。样品匀浆后加入提取溶剂20mL于超声中提取8min。
（5） 研究了三种提取溶剂对农药的添加回收率，结果表明：电位法对各种农药的检测回收率较高在89%-98%之间，说明电位法的准确度较好,符合农药残留分析的要求。
（6） 研究了现场检测的影响因素：确定真空冷冻浓缩为保存水果蔬菜对照样的最佳处理方法。并确定了抑制率和农药毒性的关系。抑制率大于70%的为高毒，抑制率50%-70%的为中毒，抑制率30%-50%的为中低毒，抑制率10%-30%的为低毒，抑制率低于10%的为无毒。
（7） 现场检测流程：以检测西红柿为例：先将部分西红柿匀浆，取西红柿匀浆液5g于100mL的烧杯中，同时于另一个烧杯中按比例加入没有加标的西红柿处理样0.463g，分别加入20mL提取溶剂甲醇:酸乙酯:酮（1:2:3）。然后，两个烧杯置于超声提取其中，提取器中水面略高于烧杯中溶剂的液面。最后，超声8min后取出。
于两个试管中分别加入酶液8mL，第一个试管加入对照样的提取液0.5mL，第二个试管加入样品提取液0.5mL，两个试管置于25℃水浴下抑制15min，再分别加入0.5%α-乙酸萘酯（底物）1.4mL，立即测pH值（pH1），然后放于40℃的水浴中反应30min后，再放于25℃水浴中10min后，测其pH值（pH2）。按照抑制率的公式计算抑制率，然后按照（6）的结果对比农药残留的毒性。